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　　实验十一、食品中亚硫酸盐含量测定 标准依据: GB/T 5009.34-2003食品中亚硫酸盐含量测定 一、目的要求 学习盐酸副玫瑰苯胺显色比色法测定食品中亚硫酸盐的实验原理，掌握实验的操作要点及测定方法。 二、实验原理 亚硫酸盐与四氯汞钠反应，生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物，此络合物于波长550nm处有最大吸收峰，且在一定范围内其颜色的深浅与亚硫酸盐的浓度成正比，可以比色定量。结果以试样中二氧化硫的含量表示。 三、仪器与试剂 一 试剂 1、四氯汞钠吸收液；2、1.2 % 氨基磺酸铵溶液 12g/L ；3、甲醛溶液（2g/L）；4、淀粉指示液； 5、亚铁溶液；6、乙酸锌溶液；7、盐酸副玫瑰苯胺溶液；8、碘溶液[c 1/2I2 0.100 mol/L]； 9、硫代硫酸钠标准溶液[c Na2S2O3·5H2O 0.100 mol/L]；10、二氧化硫标准溶液；11、二氧化硫使用液：临用前将二氧化硫标准溶液以四氯汞钠吸收液稀释成每毫升相当于2μg二氧化硫；12、氢氧化钠溶液（20g/L）；13、硫酸（1+71）。 （二）、仪器:分光光度计 四、实验步骤 （一）、样品处理 1、水溶性固体试样如白砂糖等可称取约10.00g均匀试样（试样量可视含量高低而定），以少量水溶解，置于100 mL容量瓶中，加入4mL氢氧化钠溶液（20g/L），5min后加入4mL硫酸（1+71），然后加入20mL四氯汞钠吸收液，以水稀释至刻度。 2、固体试样如饼干、粉丝等可称取5.0g～10.0g研磨均匀的试样，以少量水湿润并移入100 mL容量瓶中，然后加入20mL四氯汞钠吸收液，浸泡4 h以上，若上层溶液不澄清可加入亚铁溶液 及乙酸锌溶液各2.5mL，最后用水稀释至100 mL刻度，过滤后备用。 3、液体试样如葡萄酒等可直接吸取5.0～10.0 mL试样，置于100mL容量瓶中，以少量水稀释，加20 mL四氯汞钠吸收液，摇匀，最后加水至刻度，混匀，必要时过滤备用。 （二）、测定 吸取0.50ml～5.0 mL上述试样处理液于25 mL带塞比色管中。 另吸取0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.50、2.00 mL二氧化硫标准使用液（相当于0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、3.0、4.0μg二氧化硫），分别置于25mL带塞比色管中。 于试样及标准管中各加入四氯汞钠吸收液至10 mL，然后再加入1 mL氨基磺酸铵溶液（12g/L）、1mL甲醛溶液（2g/L）及1 mL盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇匀，放置20 min。用1cm比色杯，以零管调节零点，于波长550 nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。 五、结果计算 式中 ： X——测试样中二氧化硫的含量（g/kg）； A——测定用样液中二氧化硫的质量（μg）； m——试样质量（g）； V——测定用样液的体积（mL）。 计算结果表示到三位有效数字。 六、注意事项及说明 1、本实验法检出浓度为1mg/kg。 2、要求在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过10%。 3、亚硫酸和食品中的醛、酮和糖相结合，以结合型的亚硫酸存在于食品中。加碱是将食品中的二氧化硫释放出来，加硫酸是为了中和碱，这是因为总的显色反应是在微酸性条件下进行的。 4、显色时间时显色有影响，所以在显色时要严格控制显色时间。 5、盐酸副玫瑰苯胺的精制方法如下：称取20g盐副玫瑰苯胺于400mL水中，用50mL盐酸（1+5）酸化，徐徐搅拌，加4g～5g活性炭，加热煮沸2mm。将混合物倒入大漏斗中，过滤（用保温漏斗趁热过滤）。滤液放置过夜，出现结晶，然后再用布氏漏斗抽滤，将结晶再悬浮于1000mL-乙醇（10:1）的混合液中，振摇3min～5min，以布氏漏斗抽滤，再用反复洗涤至醚层不带色为止，于硫酸干燥器中干燥，研细后贮于棕色瓶中保存。 6、如无盐酸副玫瑰苯胺可用盐酸品红代替。 7、氯化高汞试剂有毒，使用时应注意。 8、氨基磺酸铵溶液不稳定，宜随配随用，隔绝空气保存，可稳定一周。 七、思考题 1、二氧化硫标准溶液使用时为何要对其浓度进行标定？ 2、饼干、粉丝等样品处理时，加入亚铁溶液以及乙酸锌溶液的目的是什么？ 做好本实验的操作要点是什么？ * * * *