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本发明提供了一种基于荧光光度法测定亚硫酸盐的方法及应用,所述方法包括以下步骤:(1)将定量的待测样品分散在定量的缓冲溶液或纯水中,提取待测样品中可能含有的亚硫酸盐,收集清液,取定量的清液与吡咯红Y和pH为6.0‑8.5缓冲溶液混合均匀,得到待测溶液A;(2)制备试剂空白溶液B;(3)在激发波长500‑580nm和发射波长540‑650nm下,以相同的条件分别测试待测溶液A、空白溶液B的荧光强度值,得到待测溶液A和空白溶液B的荧光强度值的差值;(4)用外标法定量。本发明的方法为一种新的亚硫酸盐的检测方法,可以用于食品中亚硫酸盐的检测,本发明方法灵敏度高、选择性好、简便快速,分析时间短。本发明的一种用于测定亚硫酸盐的试剂盒,使用简便、精确。